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超聲波DNA打斷儀進(jìn)行DNA打斷的作用是什么?

更新時間:2021-07-01 點擊次數(shù):8537
  超聲波DNA打斷儀包括:在二價陽離子、隨機(jī)DNA雙鏈結(jié)合蛋白質(zhì)、非離子表面活性劑以及一價鹽的存在下,對DNA分子進(jìn)行打斷。能夠有效提高二代測序文庫構(gòu)建的效率。DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu),是通過內(nèi)側(cè)氫鍵形成的堿基對使兩條脫氧核苷酸長鏈穩(wěn)固地并聯(lián)起來,同時堿基對之間縱向的相互作用力也進(jìn)一步提高了DNA分子的穩(wěn)定性,所以DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)是一種相對穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
  隨著高通量測序(NGS)技術(shù)的發(fā)展與成熟,在科研、診斷、體檢各市場領(lǐng)域應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大。除了市場的擴(kuò)大之外,測序技術(shù)本身開發(fā)放慢速度,制約技術(shù)擴(kuò)大應(yīng)用的瓶頸漸漸顯露出來。如今,樣品制備在NGS中的瓶頸效應(yīng)越來越明顯,新試劑、新儀器不斷涌現(xiàn),以縮短時間,提高通量。同時,新方法也在不斷開發(fā),以處理更少的樣本起始量等。
  目前,常用的染色體脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,簡稱DNA)分子片段化方法主要有四種,分別為:DNA限制性酶切法,水動力剪切法,超聲波斷裂法,噴射霧化法,每種方法各有利弊。對長鏈DNA(通常指生物染色體DNA)片段化的主要原因是短的DNA片段有利于進(jìn)行DNA分子快速雜交和高靈敏目標(biāo)探測,另外在NGS文庫構(gòu)建的過程中,片段化是一個無法避開的過程。
  超聲波DNA打斷儀基于水動力剪切法,超聲波斷裂法的片段化方法,是較為推薦的DNA分子片段化方法。另外由于DNA分子的本身的特異性,例如甲基化修飾程度等,會提高分子本身的特性,使用機(jī)械方法這種區(qū)域會與其它區(qū)域有不同的斷裂比例(幾率),這樣一定程度上引入了機(jī)械打斷的偏好性。使用低成本的非限制性內(nèi)切酶方法,擺脫打斷儀器的限制,建立適用于普通分子生物學(xué)實驗室和高通量NGS文庫構(gòu)建實驗室的DNA打斷方法。

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